¿Por qué es necesario realizar el proceso de recuperación de antígenos?
Los agentes de fijación utilizados durante la obtención del tejido crean puentes entre los aminoácidos dentro de la estructura de la proteína o con otros péptidos dentro del tejido. Estos puentes enmascaran los antígenos tisulares y restringen la unión anticuerpo-antígeno.
La capacidad alterada de los anticuerpos para acceder a los sitios de epítopos en tejido fijado puede afectar la tinción de inmunohistoquímica o la hibridación in situ. La recuperación de antígenos elimina estas interacciones bioquímicas y permite que un anticuerpo acceda al antígeno objetivo. La recuperación del antígeno se lleva a cabo antes de la tinción inmunohistoquímica o la hibridación in situ (ISH) para desenmascarar los antígenos ocultos o desnaturalizados.
Solución de citratos
Diluye residuos de formalina en el tejido.
Presión
Ayuda a que las células se vuelvan a inflar como cuando estaban vivas.
Recuperación de antígenos
Recuperador de antígenos
Diva Decloaker 10X
Decloaking Chamber de Biocare
Los laboratorios comúnmente procesan de 10 a 250 laminillas diarias.
Se ingresan las laminillas a una rejilla.
En IHQ siempre se deben usar rejillas de plástico debido a que el PVC resiste altas temperaturas y reactivos químicos.
Las laminillas se ingresan en un vaso con capacidad de 250ml.
Se prepara la siguiente solución:
10% (25ml) Recuperador de antígenos (Solución de citratos) Diva Decloaker 10X.
90% Agua destilada*
*El agua destilada tiene ph estable de 7.0
La olla debe llenarse con 500ml de agua destilada para poner las laminilas en Baño María.
En la Decloaking Chamber de Biocare se utiliza el programa 5 para la mayoría de los tejidos. El protocolo de la OMS indica que las laminillas se deberán mantener a 110ºC durante 5 min.
Excepciones:
-Cerebro 60ºC
-Elementos bacteriológicos no requieren recuperación de antígenos.
Inicar el programa.
El proceso toma 40 min:
A) Calentamiento (10 min) - temp ambiente a 110ºC
B) Presión (10 min) 110ºC
C) Enfriamiento (20 min) 110ºC a 60ºC
D) Sacar laminillas y dejar hasta que lleguen a temperatura ambiente
Una vez que esté a temperatura ambiente, se descarta la solución de citratos.*
Se rellena el vaso con agua destilada y se deja enfriar 20 minutos.
*La solución de citratos es un desecho no peligroso, por lo que puede vertirse por el desagüe.
